蛋白质组学操作-蛋白质组学课程

文章信息一览：

• 1、蛋白质组学三大基本技术
• 2、蛋白质组的经典研究路线

蛋白质组学三大基本技术

1、蛋白质组学的研究方法有蛋白质鉴定、翻译后修饰、蛋白质功能确定、蛋白质靶向定量技术。蛋白质鉴定：可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术，利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。

2、二 多维色谱法。在多维色谱法中，蛋白样品通常先被消化成肽段，然后经过离子交换、反相HPLC（high-performance liquid chromatography）而被分离。该方法的中HPLC可以直接和质谱偶联，可有效的分析极酸或极碱、高度疏水等传统2-DE方法难以分析的蛋白质，而且易于实现分析的自动化。

3、生物质谱技术是蛋白质组学研究中最重要的鉴定技术，其基本原理是样品分子离子化后，根据不同离子之间的荷质比（M/E）的差异来分离并确定分子量。对于经过双向电泳分离的目标蛋白质用胰蛋白酶酶解（水解Lys或Arg的-C端形成的肽键）成肽段，对这些肽段用质谱进行鉴定与分析。

4、质谱法：通过测量蛋白质的质量来研究其特性，包括串联质谱技术（MS/MS）用于确定蛋白质的氨基酸序列和翻译后修饰等信息。蛋白质互作网络分析：研究蛋白质间的相互作用，揭示蛋白质在细胞内不同通路中的相互作用和功能。

蛋白质组的经典研究路线

LCM-二维电泳-质谱的技术路线是典型的一条蛋白质组学研究的技术路线，除此以外，LCM-抗体芯片也是一条重要的蛋白质组学研究的技术路线。

蛋白质样品的制备：蛋白质样品的制备是蛋白质组学研究的首要环节，也是最为重要的部分。蛋白质样品的质量直接影响到科学研究的真实性和可信度。蛋白质的分离：双向凝胶电泳技术是目前最基础和常用的蛋白质分离方法，它能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术。

双向电泳（two-dimensional electrophoresis， 2-DE）与质谱（mass spectrum， MS）的结合是最常见的蛋白质组学的研究手段。双向电泳包括第一向等电聚焦（Isoelectric focusing， IEF）和第二向SDS-PAGE（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）。

蛋白质组研究要求有高分辨率的蛋白质分离及准确、灵敏的质谱鉴定技术。凝胶电泳中蛋白质的着色不仅影响蛋白质分离的分辨率，同时也影响后续的质谱鉴定。蛋白质的染色可分为有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色四类。Unlu 等提出了一种荧光差异显示双向电泳（F-2D-DIGE）的定量蛋白质组学分析方法。

双向电泳技术（理想目的：将细胞（或组织）内所有蛋白质都分离开来）质谱技术及一系列派生技术 （测蛋白质序列）3 、蛋白质互相作用研究：酵母双杂交，细菌双杂交，免疫共沉淀技术，pull-down，FRET，BiFC等 蛋白质定位：荧光标记技术，共聚焦荧光显微镜技术，免疫荧光，免疫化学等技术。

噬茵体展示技术在编码噬菌体外壳蛋白基因上连接一单克隆抗体的DNA序列，当噬菌体生长时，表面就表达出相应的单抗，再将噬菌体过柱，柱上若含目的蛋白，就会与相应抗体 特异性结合，这被称为噬菌体展示技术。

关于蛋白质组学操作，以及蛋白质组学课程的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。