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定量质谱蛋白质-质谱技术鉴定蛋白质

蛋白质工程 10个月前 (06-28) 138

文章阐述了关于定量质谱蛋白质，以及质谱技术鉴定蛋白质的信息，欢迎批评指正。

文章信息一览：

1、免疫印迹法（WB，Western blotting）：是常用的蛋白质检测方法，通过特异性抗体与目标蛋白质结合来检测目标蛋白质的表达水平。免疫组化法（IHC）：是一种在组织学样本中检测蛋白质表达的方法，利用特异性抗体结合目标蛋白质，再通过染色或荧光信号来检测目标蛋白质的表达水平。

2、双缩脲试剂检测准备双缩脲试剂和待测样品。将双缩脲试剂A液和B液混合均匀。加入待测样品至双缩脲试剂中，充分混合。观察颜色变化，如果产生紫色反应，则说明样品中含有蛋白质。紫外吸收法准备待测样品和试剂，如蛋白质标准品、蛋白质稀释液等。

（图片来源网络，侵删）

3、使用液相色谱质谱（如LC-MS/MS）直接对细胞裂解物进行蛋白质组分析，可以得到大规模的蛋白质鉴定和定量数据。专门的软件可以用来对比不同细胞中的蛋白质表达。蛋白质芯片：使用蛋白质芯片可以同时检测多种蛋白质的表达或活性。

4、尿蛋白的检测方法，就有两种：尿蛋白定性检测和24小时尿蛋白定量检测。定性检测是收集早上的第一次小便的中段尿送检。定量检测需要把从头天早上到第二天早上点对点24小时内的尿液全部收集起来，记录总尿量，混匀后取少量送检。

5、蛋白质的印迹技术用于检测和定量分析蛋白质的存在和表达水平。以下是一些常见的蛋白质印迹技术：WB免疫印迹：Western blotting是最常用的蛋白质印迹技术之一。它首先通过电泳将蛋白质分离，并将其转移到固定在膜上的聚丙烯酰胺凝胶上。

（图片来源网络，侵删）

6、免疫印迹法是一种常用于检测蛋白质的方法，通过将蛋白质样品进行电泳分离，然后转移到固体载体上，再通过与特异性抗体反应，使用化学或光学方法检测特定蛋白质的存在和表达水平。这种方法对于检测单一或少量蛋白质非常有效，但是需要耗费较长时间进行实验操作和数据分析。

蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说，蛋白质约占人体全部质量的18%，最重要的还是其与生命现象有关。[1-2]蛋白质（protein）是生命的物质基础，是有机大分子，是构成细胞的基本有机物，是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。

蛋白质鉴定：可以利用一维电泳和二维电泳并结合Western等技术，利用蛋白质芯片和抗体芯片及免疫共沉淀等技术对蛋白质进行鉴定研究。翻译后修饰：很多mRNA表达产生的蛋白质要经历翻译后修饰如磷酸化，糖基化，酶原激活等。

利用如STRING、BioGRID等数据库，构建蛋白质之间的相互作用网络。（2）识别关键蛋白或亚网络，它们可能在疾病或特定生物过程中起到中心作用。验证：使用西方印迹、免疫荧光等技术，对筛选出的关键差异蛋白进行实验验证。

这样，我们最终可以得到一个准确可靠的蛋白质组学鉴定或定量结果用于后续的分析了。

1、过在蛋白质水平上对细胞或机体基因表达的整体蛋白质的定量研究，来揭示生命的过程和解释基因表达控制的机理。

2、基本过程是将蛋白质被打成单电荷片段，通过电磁偏转得到一系列长度不等的片段，由于可测得质量，将片段排序，就可知道某个位点的氨基酸的质量，进而得知氨基酸的种类，重复此过程，可得知所有氨基酸的种类，进而得知蛋白质的序列，一般都是以及序列的信息，毕竟蛋白质测序之前要经过预处理。

3、根据氨基酸的亚基不同来测吸收峰的不同，从而确定蛋白质中的氨基酸残基的序列再看看别人怎么说的。

4、是指质谱仪测到的质荷比与它实际的质荷比的差值，除以它真实的质荷比与1，000，000的乘积。所以它是以ppm为单位的（百万分之一），这个数值看起来更方便。目前高分辨质谱仪质量准确度在2-5个ppm的范围之内。

5、然后，这些离子会被质谱仪入口处的真空抽到质谱仪里，同时被电场驱动进入质谱仪。于是，就实现了气化、电离以及真空过渡三重需求。这就是液相色谱与质谱的接口，即ESI电喷雾电离。

6、根据一级质谱可以测得多肽整体的分子量，多肽碎裂时会产生一系列在肽链不同位置断裂而形成的碎片离子，可以得到多肽的二级谱图，根据二级质谱相近谱峰之间的质量数之差可以推算出对应的氨基酸序列。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。

双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

凯氏定氮法凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1833年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。

【答案】：蛋白含量的测定常用的方法有：考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。（1）考马斯亮兰G-250染色法：考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，在595nm处有最大的光吸收，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

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