如何测量蛋白质的含量-怎样测量蛋白质含量

文章信息一览：

• 1、如何准确测定样品中蛋白质的含量
• 2、怎样检测黄豆的蛋白质含量?
• 3、蛋白质简单检测方法
• 4、蛋白质含量测定
• 5、蛋白浓度测定的方法具体有哪些?
• 6、蛋白质含量的测定方法有哪些

如何准确测定样品中蛋白质的含量

试剂：a、标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。 如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。

这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。

凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右（12%~一19%），因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即： 蛋白质含量=含氮量/16%。

比色法是测定蛋白质含量最常用的方法之一。原理是利用蛋白质与染色剂反应生成复合物，进而通过比色反应来测定蛋白质浓度。例如，布拉德福酸染色法Bradfordmethod和比二巴氏法BicinchoninicAcidmethod都是常用的比色法。光谱法 光谱法是根据蛋白质分子特定的吸收光谱来测定其浓度的方法。

怎样检测黄豆的蛋白质含量?

不用检测，黄豆的蛋白质含量为51，限制氨基酸为蛋氨酸。在中国食物成分表里都有。

看质地：优质的黄豆质地坚硬，不易破碎，黄豆的脐色有黄白色、淡褐色、褐色、深褐色，黄白色、淡褐色的黄豆质量较好，褐色或深褐色的黄豆质量较次。看水分：优质的黄豆一般质地干燥，水分低。把手伸进黄豆口袋如果感受到潮湿感，则该黄豆水分较大，容易受潮生霉，不宜购买。

选择高蛋白的食物浆液，比如豆浆和蛋清。然后准备检测蛋白质的双缩脲试剂，由A液和B液组成，A液：氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液。B液：硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。

蛋白质简单检测方法

蛋白质简单检测方法：变色试剂法、尿液测定法、低ryg钙素亲和层析法、BCA法或Lowry法。变色试剂法：例如用布拉德福试剂、比尔斯试剂等进行反应，会产生颜色变化，可以通过颜色的变化程度或者光密度的测量来估算蛋白质的含量。尿液测定法：尿液中的蛋白质含量可以作为一种快速检测指标。

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

直接测定UV法：这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。

蛋白质的盐析取5mL蛋白质溶液，加入等体积饱和硫酸铵溶液（浓度为50%饱和），微微摇动试管，使溶液混合均匀后，静置数分钟，球蛋白即析出呈絮状沉淀（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵），用滤纸滤取上清液，滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解，析出的即为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。

一般用双缩脲试剂鉴定，双缩脲试剂可以和蛋白质发生紫色反应。

蛋白质含量测定

1、【答案】：蛋白含量的测定常用的方法有：考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。（1）考马斯亮兰G-250染色法：考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，在595nm处有最大的光吸收，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

2、凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右（12%~一19%），因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即： 蛋白质含量=含氮量/16%。

3、蛋白质中的肽键与之类似，凡是具两个以上肽键的物质均会也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。此反应可用于定性鉴定，也可在540nm比色，定量测定蛋白含量。***反应 含有芳香族氨基酸特别是酪氨酸和色氨酸的蛋白质在溶液中遇到硝酸后，先产生白色沉淀，加热则变黄，再加碱颜色加深为橙***。

蛋白浓度测定的方法具体有哪些?

蛋白浓度测定的方法： 紫外分光光度法 紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法，不需要任何试剂，操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收，这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的，所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。

测蛋白浓度的方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法。凯氏定氮法：凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。

双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

双缩脲法：双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。

蛋白质含量的测定方法有哪些

1、【答案】：蛋白含量的测定常用的方法有：考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。（1）考马斯亮兰G-250染色法：考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，在595nm处有最大的光吸收，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

2、双缩脲法。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

3、凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。

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