蛋白质与甲醇-甲醇和蛋白质会发生反应吗

蛋白质工程 34

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甲醇为什么能固定蛋白质

不能。甲醇是完全不能使蛋白质固定的,此物质只具有让蛋白质变性的作用,并且SDS与蛋白分离。蛋白质是一种复杂的有机化合物、旧称朊、氨基酸是组成蛋白质的基本单位、氨基酸通过脱水缩合连成肽链。

甲醇固定细胞的原理是利用甲醇的脱水和蛋白质交联作用,使细胞内的蛋白质固定在细胞内部,从而保持细胞的形态和结构,甲醇固定细胞的方法如下:向每个玻片中加入100–200μL冰冷的甲醇、5%醋酸。在-20℃放置10分钟,最好置于Coplins瓶中,然后用PBS洗涤3次。

蛋白质与甲醇-甲醇和蛋白质会发生反应吗
(图片来源网络,侵删)

甲醇能使SDS与蛋白分离,甲醇浓度越高SDS与蛋白分离越快,但高浓度的甲醇对蛋白会有固定作用,不利于蛋白从胶里跑出来。

很多物质能使蛋白质变性,而凝固。酒精就是其中的一种。

二是转膜缓冲液,内要含20%甲醇,新鲜配制,反复使用的话注意甲醇会蒸发掉。如果连续使用的话两三次应该还可以。甲醇一是能够洗掉跑胶时泡透了的SDS(SDS使蛋白带负电,方便移动),二是帮助蛋白固定到膜上面。它同时有收缩胶的孔径的副作用,但对小分子无影响。3。三是膜的孔径。

蛋白质与甲醇-甲醇和蛋白质会发生反应吗
(图片来源网络,侵删)

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