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蛋白质浓度测定双缩脲-蛋白质浓度测定双缩脲法中标准曲线的绘制

蛋白质工程 12个月前 (05-07) 139

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双缩脲法测定蛋白质的优缺点：优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好，双缩脲试剂可以长期保存。

双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液.先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL，振荡均匀（营造碱性环境），再加入1～2滴双缩脲试剂B，振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。

（图片来源网络，侵删）

双缩脲试剂由NaOH溶液（0.1g/mL）和CuSO溶液（0.01g/mL）配制而成，配制比例为5：1。但是双缩脲试剂不用现配现用，先加入NaoH营造碱性环境，再加入CuSO。双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。

全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量，直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色，即为滴定终点，结算出蛋白质含量。

全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量，直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色，即为滴定终点，结算出蛋白质含量。双缩脲法。

（图片来源网络，侵删）

1、蛋白质含有多个肽键，在碱性溶液中能与Cu 2+ 络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。

2、标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。

3、双缩脲法的优势在于：反应灵敏度高，颜色变化显著，干扰物质较少，测定过程快速简便。适用于快速初步测定，尤其在需要快速结果的场景。然而，它也并非完美：灵敏度相对较低，适合1-20 mg/mL的蛋白质范围。

4、双缩脲法测定蛋白质如下：双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。

二辛可酸法测定蛋白质含量：蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin—酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。微量凯氏定氮法：含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸铵。

蛋白质浓度测定，作为生物实验中的基石，BCA法（二辛可酸法或二喹啉甲酸法）是其中不可或缺的一环。让我们深入探讨这一高效实用的测定手段。实验原理揭示BCA法巧妙地利用了蛋白质与铜离子的化学反应特性。

BCA（bicinchoninicacid，二辛可酸）法测定蛋白质即在碱性条件下蛋白质与Cu2+络合，并将其还原成Cu1+。

二辛可酸法相对于其他分析方法的显著优点是在蛋白质定量试验中，最常用的方法是BCA法蛋白定量。

关于蛋白质浓度测定双缩脲，以及蛋白质浓度测定双缩脲法中标准曲线的绘制的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。