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蛋白质的测定有哪些方法-蛋白质测定方法lowry

蛋白质工程 2个月前 (03-12) 56

本篇文章给大家分享蛋白质的测定有哪些方法，以及蛋白质测定方法lowry对应的知识点，希望对各位有所帮助。

文章信息一览：

1、紫外法利用蛋白质在280nm波长的光吸收进行测定。280nm-260nm吸收差法通过计算280nm与260nm吸收值的差值来估算蛋白质浓度。此方法灵敏度较高，但需注意样品中的核酸干扰。Bradford法使用考马斯亮兰（CBG）染色法测定蛋白质含量。CBG在酸性环境下呈茶色，在中性环境下呈蓝色。

2、胶体金测定法利用氯金酸的水溶胶与蛋白质结合，颜色的改变与蛋白质有定量关系，可用于蛋白质的定量测定。其他方法包括测定某些蛋白质中的特殊非蛋白质基团，如过氧化物酶含有亚铁血红素基团，可测403nm波长的吸光来定量之。含特殊金属的酶（如镉），则可追踪该金属。

（图片来源网络，侵删）

3、蛋白质含量测定常用方法包括定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法和紫外吸收法。其中，定氮法通过将蛋白质氮转化为氨，用酸吸收后滴定，适用于标准蛋白质含量的准确测定，但灵敏度低，需耗时8～10小时。

4、间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

双缩脲法。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

（图片来源网络，侵删）

胶体金测定法基于胶体金与蛋白质结合产生蓝色的原理。胶体金是一种带负电荷的疏水胶体，遇蛋白质转变为蓝色，颜色变化与蛋白质含量定量相关。其他方法包括利用过氧化物酶的亚铁血红素基团在403nm波长的吸光度进行定量，以及追踪含特殊金属的酶中的金属。

凯氏定氮法双缩脲法酚试剂法（考马斯亮蓝法）紫外分光光度法详细解释凯氏定氮法是一种经典的蛋白质测定方法。它通过消化样本，将蛋白质中的氮转化为氨，并使用酸碱滴定法对氨进行测量，从而计算出蛋白质的含量。此方法适用于多种样本，具有较高的准确度和可靠性。

色素结合法（Bradford法）直接测定法利用蛋白质与色素分子结合物的光吸收进行测定。考马斯亮蓝（CBG）染色法测定蛋白质含量，蓝色的呈色强度与样本中的蛋白质量成正比。间接测定法则测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量表示蛋白质含量。

间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。

蛋白质检测方法：1，微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。

测定蛋白质含量有以下方法：凯氏定氮法这是测定总蛋白质含量的一种经典方法。其原理是通过催化剂消解样品中的蛋白质，使蛋白质中的氮元素释放出来，然后通过化学方法测定氮含量，从而计算蛋白质含量。该方法具有准确度高、操作相对简单的特点。但所需时间较长，需要使用特定的化学试剂和仪器。

吸光度法（Absorbance Method）：这是一种最常用的蛋白质定量方法，通过测量溶液在特定波长下的吸光度来计算蛋白质浓度。吸光度与溶液中的蛋白质浓度成正比，因此可以通过已知的蛋白质吸光系数和稀释倍数来计算蛋白质浓度。

蛋白质定量的方法主要包括以下几种：凯氏定氮法。这是最经典的蛋白质定量方法，原理是蛋白质中的氮含量相对稳定，通过测定样品中的氮含量来推算蛋白质的含量。这种方法具有操作简单、适用广泛的特点，但误差较大。紫外分光光度法。此方法主要利用蛋白质在特定波长下吸收紫外线的性质进行定量。

概述蛋白质定量方法主要用于测定样品中蛋白质的含量。常见的蛋白质定量方法包括凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法以及电导法等。具体方法解释凯氏定氮法此方法是一种经典的蛋白质定量方法。

胶体金测定法利用氯金酸的水溶胶与蛋白质结合，颜色的改变与蛋白质有定量关系，可用于蛋白质的定量测定。其他方法包括测定某些蛋白质中的特殊非蛋白质基团，如过氧化物酶含有亚铁血红素基团，可测403nm波长的吸光来定量之。含特殊金属的酶（如镉），则可追踪该金属。

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