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福林-酚法测定蛋白质含量-福林酚法测定蛋白浓度原理

蛋白质工程 2个月前 (03-12) 31

今天给大家分享福林-酚法测定蛋白质含量，其中也会对福林酚法测定蛋白浓度原理的内容是什么进行解释。

文章信息一览：

1、同时，在碱性条件下Folin-酚试剂极不稳定，从而易被蛋白质还原而成蓝色反应。2，在一定浓度范围内，蓝色化合物的蓝色深浅与蛋白质浓度成正比。故通过测定相应浓度梯度的蛋白质标准溶液吸光度可依其作出标准由线，以此绘制的标准有线和供试品中蛋白质溶液吸光度可求出供试品中蛋白质的含量。

2、再者是Folin-酚试剂法（Lowry法），该方法利用蛋白质与酚试剂及铜离子间的氧化还原反应产生蓝色产物来进行定量分析。最后是紫外吸收法，该方法通过测量蛋白质在280纳米紫外光下的吸收值来估算蛋白质浓度。

（图片来源网络，侵删）

3、在碱性条件下，蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+， Cu+能定量地与Folin－酚试剂反应生成蓝色物质，600nm比色测定蛋白质含量。灵敏度较高（约 0.1 mg），但较麻烦，也会受硫酸铵及硫醇化合物的干扰。步骤中各项试剂的混合，要特别注意均匀澈底，否则会有大误差。

4、碱性条件下，蛋白质的肽键与铜结合形成复合物。Folin-酚试剂中的磷钼酸盐-磷钨酸盐在蛋白质的酪氨酸和色氨酸残基作用下还原，生成深蓝色物质。该物质的蓝色深度与蛋白质含量成正比，与双缩脲方法原理类似，但Folin-酚试剂的加入增强了显色量，提高了蛋白质检测的灵敏度。

5、双缩脲法：该方法利用双缩脲与蛋白质结合产生的特定颜色变化，通过比色法测量蛋白质含量。 Folin-酚试剂法：通过样品与Folin-酚试剂反应后，通过测定其氧化还原反应的强度，推算蛋白质的含量。紫外吸收法：利用蛋白质对特定波长光的吸收特性，通过测量光的吸收程度来确定蛋白质含量。

（图片来源网络，侵删）

6、在实验过程中，首先需要准确称取一定量的蛋白质样品，并将其溶解于适当的缓冲液中。随后，将溶解的蛋白质样品与Folin酚试剂按一定比例混合，随后在室温下静置一段时间，使反应充分进行。反应完成后，通过观察溶液颜色的变化，利用比色计测量吸光度，从而计算出蛋白质的含量。

原理蛋白质与福林（Folin）-酚试剂反应，产生蓝色复合物。作用机理主要是蛋白质中的肽键与碱性铜盐产生双缩脲反应，同时也由于蛋白质中存在的酪氨酸与色氨酸同磷钼酸-磷钨酸试剂反应产生颜色。呈色强度与蛋白质含量成正比，是检测可溶性蛋白质含量最灵敏的经典方法之一。

一）方法：考马斯亮蓝比色法；福林酚比色法（二）目的要求：掌握测定蛋白质含量的原理和方法，了解蛋白含量测定的意义及使用方面。练习分光光度计的使用和标准曲线的制作。（三）重点：了解实验原理，正确运用方法。（四）难点：样品提取及适度稀释，标准曲线制作和使用。

在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比，以蛋白质对照品溶液作标准曲线，***用比色法测定供试品中蛋白质的含量。本法灵敏度高，测定范围通常可达20250g。本法干扰物质较多，对双缩脲反应产生干扰的离子，同样容易干扰福林-酚反应，且影响还要大。

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