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基因工程限制酶作用在哪里-基因工程限制酶作用在哪里进行

基因工程 12个月前 (05-15) 139

文章阐述了关于基因工程限制酶作用在哪里，以及基因工程限制酶作用在哪里进行的信息，欢迎批评指正。

文章信息一览：

1、限制酶作用于磷酸二酯键，使其断裂。水解一个磷酸二酯键需要消耗一分子水，质粒是环状的双链DNA，在某一位点切割，两条链的磷酸二酯键都要断裂一个，所以需要两分子水，断裂后一条链只有一端有一个游离的磷酸基团，两条链就有两个游离的磷酸基团。

2、DNA聚合酶和DNA连接酶都是形成磷酸二酯键，但两者不同之处是：DNA聚合酶催化单个脱氧核酸聚合，且需要有模板；而DNA连接酶是将两个DNA片段之间连接。RNA聚合酶，催化转录形成RNA的酶，将单个核糖核苷酸聚合，也是形成磷酸二酯键。限制酶是断裂磷酸二酯键。解旋酶是使氢键断裂。

（图片来源网络，侵删）

3、如图所示，和二个糖、醇等的羟基（R—OH， R′—OH）形成酯时的键为磷酸二酯键。代表性的磷酸二酯键是核酸的核苷酸间的键，由于相邻核苷酸的糖的3′－OH和5′－OH中磷酸分子脱氢，五碳糖脱去羟基而形成磷酸二酯键而聚合起来。此键可由酸、碱或酶的作用而水解。所以，使此键断裂时需要水。

4、首先，是限制性内切酶（restriction endonuclease）吧。图中是3，5-磷酸二酯键。核酸酶分为2种，一种在3‘-OH与磷酸基间断裂，产物为5’-磷酸核苷酸；一种在5‘-OH与磷酸基间断裂，产物为3’-磷酸核苷酸。

5、限制性内切酶作用于磷酸二酯键，是基因工程的的第一步获取目的基因所必须用的酶 DNA水解酶是将大分子DNA分解成小分子核苷酸所需的酶也作用于磷酸二酯键，不过这只是DNA的初步水解，还有的DNA水解酶可以让DNA水解成更小的单位——碱基，磷酸，脱氧核糖，即DNA的彻底水解。

（图片来源网络，侵删）

6、DNA限制酶切断DNA的碱基序列的方式是切断磷酸二脂键。磷酸二酯键（phosphodiester linkage）：一种化学基团，指一分子磷酸与两个醇（羟基）酯化形成的两个酯键。该酯键成了两个醇之间的桥梁。

1、基因工程中常用的工具酶不外乎DNA聚合酶，RNA逆转录酶，DNA外切酶，RNA酶，限制性核酸内切酶等。其中种类最多的就是限制性核酸内切酶，利用不同的限制性核酸内切酶组合，可以实现将不同目的片段克隆至目标载体，而这是其他的酶无法替代的。

2、Ⅲ类限制性核酸内切酶　只由一条肽链构成，仅需Mg2+，切割DNA特异性最强，且就在识别位点范围内切断DNA。是分子生物学中应用最广的限制性内切酶。通常在重组DNA技术提到的限制性核酸内切酶主要指Ⅱ类酶而言。

3、基因工程中主要的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶。限制性核酸内切酶用来切割运载体和目的基因两端；而DNA连接酶则是将目的基因与运载体的黏性末端连接在一起。

4、限制性核酸内切酶：限制性核酸内切酶是基因工程的重要工具酶，被称为基因工程的分子手术刀。在细菌中这些酶的功能是降解外来DNA分子，以限制或阻止病毒侵染。这种酶能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列，在这一序列内将双链DNA分子切断。（3）连接酶：将外源DNA与载体相连接的一类酶。

5、基因工程工具酶主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类，具体解释如下：DNA限制性内切酶生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。

1、限制性核酸内切酶：限制性核酸内切酶是基因工程的重要工具酶，被称为基因工程的分子手术刀。在细菌中这些酶的功能是降解外来DNA分子，以限制或阻止病毒侵染。这种酶能识别双链DNA分子中一段特异的核苷酸序列，在这一序列内将双链DNA分子切断。（3）连接酶：将外源DNA与载体相连接的一类酶。

2、限制酶的作用主要是用来提取目的基因，这主要是由酶的作用特性来决定的。限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列，并在每条链***定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。

3、限制性核酸内切酶的作用大部分限制性核酸内切酶识别DNA序列具有回文结构特征，切断的双链DNA都产生5’磷酸基和3’羟基末端。

4、限制酶可将外来的DNA切断，即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力，但对自己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。

6、基因工程中常用的工具酶不外乎DNA聚合酶，RNA逆转录酶，DNA外切酶，RNA酶，限制性核酸内切酶等。其中种类最多的就是限制性核酸内切酶，利用不同的限制性核酸内切酶组合，可以实现将不同目的片段克隆至目标载体，而这是其他的酶无法替代的。

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