小鼠蛋白质提取及含量测定-小鼠dna提取实验报告

文章阐述了关于小鼠蛋白质提取及含量测定，以及小鼠dna提取实验报告的信息，欢迎批评指正。

文章信息一览：

• 1、如何选择合适的蛋白含量测定方法
• 2、福林酚法测定蛋白含量
• 3、蛋白质提取方法比较
• 4、蛋白质的测定bradford法是什么?
• 5、请设计试验,利用基因工程手段表达并分离小鼠免疫球蛋白。

如何选择合适的蛋白含量测定方法

1、双缩脲法 双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。

2、比色法是测定蛋白质含量最常用的方法之一。原理是利用蛋白质与染色剂反应生成复合物，进而通过比色反应来测定蛋白质浓度。例如，布拉德福酸染色法Bradfordmethod和比二巴氏法BicinchoninicAcidmethod都是常用的比色法。

3、间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合形成不溶性的盐沉淀。用分光光度计测定未结合的色素，以每克样品结合色素的量来表示蛋白质含量的多少。

4、凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右（12%~一19%），因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即： 蛋白质含量=含氮量/16%。

福林酚法测定蛋白含量

在一定浓度范围内，蓝色化合物的蓝色深浅与蛋白质浓度成正比。故通过测定相应浓度梯度的蛋白质标准溶液吸光度可依其作出标准由线，以此绘制的标准有线和供试品中蛋白质溶液吸光度可求出供试品中蛋白质的含量。

原理：蛋白质与福林酚试剂反应，生成深蓝色复合物。蓝色的深浅与蛋白质含量成正比。可用分光光度计于500nm波长下进行测定。与标准曲线对照，而确定蛋白质含量。

酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。

福林-酚法是双缩脲法的发展，包括两步反应：（1）在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。

此方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为5~100μg蛋白质。FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。

蛋白质提取方法比较

1、机械破碎法（匀浆）1 利用机械力将细胞破碎。常用的设备：高速组织捣碎机，匀浆器，研钵等。不同组织的特性来选择不同的方法，动物的胰肝脑一般较柔软，用普通匀浆器研磨即可，而肌及心肌组织较韧，需预先搅碎成匀浆。

2、至今还没的单独或一***成的方法能移把任何一种蛋白质从复杂的混合蛋白质中提取出来，因此往往***取几种方法联合使用。④电泳法：各种蛋白质在同一pH条件下，因分子量和电荷数量不同而在电场中的迁移率不同而得以分开。

3、常见的分离提纯蛋白质的方法有： 盐析与有机溶剂沉淀：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，以破坏蛋白质的胶体性质，使蛋白质从溶液中沉淀析出，称为盐析。常用的中性盐有：硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等。

4、盐析法 优点是盐析法简单方便，可用于蛋白质抗原的粗提、丙种球蛋白的提取、蛋白质的浓缩等。缺点是盐析法提纯的抗原浓度不高，只用于抗原的初步纯化。

蛋白质的测定bradford法是什么?

1、年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

2、bradford法测定蛋白质含量，也就是考马斯亮蓝法，其原理是考马斯亮蓝在游离状态下呈棕红色，最大光吸收在488nm； 当它与蛋白质结合后变为蓝色，蛋白质—色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。

3、***用Bradford法，即考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。原理是考马斯亮蓝在电离状态下呈现棕红色，最大吸光量为488nm。当与蛋白质结合时，它变成蓝色，并且蛋白质与色素结合时在波长595nm处吸收光最大。

4、是的，先用OD和蛋白质浓度在EXCEL做标准曲线。OD值为X轴，蛋白质浓度为Y，生成曲线，从曲线里得出方程。然后将未知蛋白的OD值代入方程，就能求出未知蛋白的蛋白质浓度。测的吸光值不要太大和太小。否则误差太大。

5、Bradford法测定bai蛋白质浓度：实验原理。双缩脲法（duBiuret法）和zhiFolin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制dao，促使科学家们去寻找更好的蛋。

请设计试验,利用基因工程手段表达并分离小鼠免疫球蛋白。

人源性抗体：人源性抗体是通过将人的抗体互补决定区（CDR）替换入鼠源性单克隆抗体的CDR中而形成的。这样产生的抗体中鼠源性成分极少，因此被称为人源化抗体。

如果将Cre重组酶cDNA通过基因工程的手段置于组织或细胞特异性启动子之下，可以得到Cre组织/细胞特异性表达的Cre小鼠，也叫Cre工具小鼠。 跟Flox小鼠交配之后，可以得到条件性基因敲除小鼠。

通过与野生型小鼠繁殖得到正确同源重组ES细胞来源的Knockin小鼠。Knockin小鼠可与各类表达Cre重组酶的小鼠杂交，获得组织特异性表达的小鼠模型。

基因工程也称为遗传工程，是生物技术的主体技术。基因工程是指按照人类的愿望，将不同生物的遗传物质在体外人工剪切并和载体重组后转入细胞内进行扩增，并表达产生所需蛋白质的技术。

所谓蛋白质工程，就是利用基因工程手段，包括基因的定点突变和基因表达对蛋白质进行改造，以期获得性质和功能更加完善的蛋白质分子。 蛋白质是生命的体现者，离开了蛋白质，生命将不复存在。

一般一个载体只携带某一段外源DNA，一个细胞只接受一个重组DNA分子。最后培养出来的细胞群中只有一部分、甚至只有很小一部分是含有目的序列的重组体（recombinant）。

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