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蛋白质组itraq-蛋白质组学

蛋白质工程 2个月前 (03-06) 38

文章阐述了关于蛋白质组itraq，以及蛋白质组学的信息，欢迎批评指正。

文章信息一览：

1、iTRAQ/TMT的主要区别是什么?
2、定量蛋白组学技术如何选择?
3、基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ,TMT,SILAC
4、itraq蛋白质组学定量分析
5、iTRAQ技术背景及原理
6、“iTRAQ”是什么的缩写?

iTRAQ/TMT的主要区别是什么?

1、iTRAQ与TMT是两种广泛应用的蛋白质组标记定量技术。它们均出自于Thermo公司与AB SCIEX公司的研发，基于相似的原理。不过，它们在应用能力上存在主要区别。TMT技术最高支持16组不同生物样品的并行标记，而iTRAQ则限于8组。

2、iTRAQ技术是一种基于同位素的标记方法，允许同时分析最多8个不同样本中的蛋白质。通过在肽段的N端及赖氨酸残基上添加同位素标记，实现不同样本间蛋白质表达水平的定量比较。质谱分析识别并分解标记的肽段，产生报告离子，其强度反映了原始样本中相应蛋白质的丰度。

（图片来源网络，侵删）

3、ITRAQ与TMT同为等重标签标记技术，原理一致，区别在于化学结构略有不同。ITRAQ为当前主流技术，而TMT相关研究文章较少。新型技术如ITRAQ/TMT/MultiNotch MS使用***碎片报告离子定量，能进一步提高分析精度与定量准确性。ITRAQ标签由报告基团、平衡基团及肽反应基团组成。

4、iTRAQ的优势包括操作简单快捷、适用于多个样品的高通量检测、实验设计更加灵活、在肽段水平上进行体外标记、具有重复性好、灵敏度高的特点。TMT是Thermo Fisher Scientific开发的肽体外标记技术，最多使用10个同位素标签。

5、iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）和TMT（tandem mass tags）技术是基于同位素标记的相对定量方法，适用于同一物种、同一组织类型的样本。这些技术使得比较不同实验样本***定蛋白质的相对丰度成为可能，且具有良好的稳定性与重复性。

（图片来源网络，侵删）

6、iTRAQ&TMT适用于相同组织的相对定量分析，不能用于鉴定有或无状态，且不能将不同组织部位混合标记，更不允许不同物种的样品混合分析。相较于LFQ，iTRAQ&TMT对蛋白总量的需求较高，至少需达到100ug以上。在进行iTRAQ&TMT标记实验时，需要注意以下几点。

定量蛋白组学技术如何选择?

1、综上所述，选择定量蛋白组学技术时应综合考虑研究目标、样本特性、实验条件和资源。Label-free技术适用于差异较大的样本，iTRAQ和TMT技术适用于同一物种同一组织类型的样本，而DIA技术则特别适用于大规模样本研究。研究人员应根据具体情况和需求，选择最合适的定量蛋白组学技术，以获得准确、可靠的结果。

2、在选择定量蛋白质组学方法时，应根据具体科研项目及前期研究积累决定。百泰派克生物提供免费咨询服务，欢迎咨询。

3、综上所述，当研究旨在揭示样本间的蛋白质差异，探究其生物学功能或机理改变时，定量蛋白质组学分析成为了理想选择。

基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ,TMT,SILAC

1、SILAC是一种用于高通量定量蛋白质组学的有效方案，根据哺乳动物细胞增殖原理设计，用于定量蛋白质组学研究，分析细胞中的蛋白质相互作用和表达差异。

2、因此，不基于凝胶的定量蛋白质组学方法逐渐发展，特别是基于稳定同位素标记的SILAC技术，显著提高了定量的准确性。然而，SILAC技术存在成本高、仅适用于体外培养细胞、最多只能同时标记三组样品的局限性。

3、iTRAQ技术，由美国应用生物系统公司ABI研发，是一种多肽体外标记技术。此技术使用4种或8种同位素标签，标记多肽的氨基基团，进行串联质谱分析，能同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量或绝对含量。iTRAQ技术具有高通量、高覆盖度和高灵敏度的特点，但成本较高。

itraq蛋白质组学定量分析

1、Itraq蛋白质组学定量技术，***用稳定同位素标记多肽，通过串联质谱分析，能同时比较多个样本中的蛋白质相对含量，适用于研究不同病理或发育阶段蛋白质表达差异。ITRAQ与TMT同为等重标签标记技术，原理一致，区别在于化学结构略有不同。ITRAQ为当前主流技术，而TMT相关研究文章较少。

4、iTRAQ技术是一种由美国应用生物系统公司于2004年推出的蛋白组定量分析技术，结合了同位素标记法与串联质谱技术。其能够高通量地寻找并准确进行相对或绝对定量不同蛋白质组的差异蛋白，广泛应用于蛋白质组学领域。

5、iTRAQ Labeling和Label Free在蛋白质组学研究中是两种常用的定量方法。iTRAQ标记（iTRAQ labeling）和非标记定量技术，都致力于实现对蛋白质组学的非靶向、定性定量分析。非标记定量技术不依赖同位素标记，直接通过质谱鉴定和分析蛋白质肽段。

iTRAQ技术背景及原理

iTRAQ技术是一种由美国应用生物系统公司于2004年推出的蛋白组定量分析技术，结合了同位素标记法与串联质谱技术。其能够高通量地寻找并准确进行相对或绝对定量不同蛋白质组的差异蛋白，广泛应用于蛋白质组学领域。

术服务，包括样本还原、变性、半胱氨酸封闭、消化蛋白、iTRAQ试剂标记、MS/MS质谱检测及分析等的全套服务。该技术可以为你寻找差异表达蛋白，并分析其蛋白功能，同时可以对一个基因组表达的绝大多数蛋白质或一个复杂的混合体系中的绝大多数蛋白质进行精确定量和鉴定。

技术路线与方法：研究***用肿瘤组织、细胞、小鼠为研究对象，运用iTRAQ标记定量蛋白组学、蛋白质谱鉴定、表达谱芯片等技术，分析了VN1R5与顺铂耐药性的关系。通过CRISPR/Cas9技术敲除VN1R5基因和过表达VN1R5，证实了VN1R5在顺铂耐药中的作用。

定量检测可以研究不同生理状态及不同时间点上各种蛋白表达量的变化，研究意义非常重大。基于MS1的定量方法包括ICAT、SILAC和label free非标记定量。SILAC是一种相对定量方法，我们可以得到两组样品之间每种蛋白含量的差异值，而无法知道它们的绝对量。基于MS2的定量方法主要包括iTRAQ和TMT。

设备先进：公司配备了先进的仪器设备，如Thermo公司的LTQ Orbitrap质谱仪用于SILAC实验，美国应用生物系统的QSTAR XL质谱仪用于iTRAQ实验。同时，***用LC-MS技术，结合高性能的强阳离子交换柱和C-18反相柱，以及超灵敏质谱仪，实现了高通量、高效、高精度的蛋白质分析。

PRM的优势显著，包括质量精度达到ppm级别，有效消除背景干扰和假阳性问题，提升复杂背景下的检测限和灵敏度；全扫描产物离子，无需选择离子对，便于建立分析方法；线性范围宽，可达5-6个数量级。SRM/MRM技术同样具备高灵敏度和高产量，其分析方法开发也更为简便。