蛋白质的纯化实验-蛋白质的纯化实验现象

今天给大家分享蛋白质的纯化实验，其中也会对蛋白质的纯化实验现象的内容是什么进行解释。

文章信息一览：

• 1、如何分离纯化清蛋白、球蛋白、胶蛋白、谷蛋白
• 2、蛋白质提取.纯化的学习报告
• 3、求蛋白分离纯化步骤

如何分离纯化清蛋白、球蛋白、胶蛋白、谷蛋白

1、传统的奥斯本门德尔分离法。清蛋白类：溶于水，加热凝固，为强碱、金属盐类或有机溶剂所沉淀，能被饱和硫酸铵盐析。球蛋白类：不溶于水，溶于中性盐稀溶液，加热凝固。为有机溶剂所沉淀，添加硫酸铵至半饱和状态时则沉淀析出。

2、除我们平时说的清蛋白，白蛋白，球蛋白，谷蛋白等等外，请记住：酶类，荷尔蒙，激素，抗原，抗体等均是蛋白的一种，一般具有催化活性。

3、加热凝固。能被有机溶剂沉淀，可以发生硫酸铵盐析沉淀作用。等电点为 PH5～5。球蛋白主要存在于血液（血纤维蛋白原）、肌肉（肌肉球蛋白）、牛乳（乳球蛋白）和豆类（豆球蛋白）等。醇溶谷蛋白在醇溶谷蛋白的氨基酸构成中，脯氨酸和谷氨酸含量高。但是，几乎不含赖氨酸、精氨酸和组氨酸。

4、连续累进提取法将小麦蛋白质分离成清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白；快速提取法将小麦蛋白质分离成单体蛋白、可溶性谷蛋白和不溶性谷蛋白。

5、植物蛋白大致分为两类：一是完全蛋白质，如大豆蛋白质；二是不完全蛋白质，绝大多数的植物蛋白质属于此类。植物蛋白是蛋白质的一种，来源是从植物里提取的，营养与动物蛋白相仿，但是更易于消化。含植物蛋白最丰富的是大豆。但在饮食中，植物蛋白和动物蛋白要搭配食用。

6、球状蛋白质/，如清蛋白和球蛋白，广泛存在于动物组织中，清蛋白因其易溶性而得名，球蛋白则在稀酸中溶解度更高。植物蛋白中的谷蛋白和醇溶谷蛋白，不溶于水，却能溶于酸碱溶液，后者在70-80%的乙醇中溶解。

蛋白质提取.纯化的学习报告

烦做这又贵又麻烦的一步呢？原因在于这一步可以去掉核提取物里面的核酸酶，所以如果直接跑DNA affinity column， column上的DNA Oligos会被降解掉！另外一个原因是，核提取物有一些可以和DNA非特异结合的蛋白，这些蛋白会饱和DNA affinity column，影响要转录因子的纯化。

纯化过程分为三个阶段：前处理以保持活性，粗略分离以去除杂质，再到精细纯化如层析、电泳等，结晶则验证其天然状态的完整性。蛋白质提取策略多种多样，从水溶液开始，比如利用稀盐溶液在低温下操作，关键在于控制pH值和盐浓度，以保持蛋白质的稳定性。

首先从选材的角度比较了DNA的提取和蛋白质的提取的差异，接下来引导学生分析如何处理样品将血红蛋白释放出来，并进行粗分离，最后再引导学生分析如何利用已学的方法将血红蛋白与其他蛋白质的混合溶液进行纯化，并进行血红蛋白的纯度鉴定。

蛋白质分离纯化技术是一种利用各种原理来改变蛋白质溶解度，从而实现有效成分纯化的科学方法。主要涉及到以下几种策略： 盐析法：依据蛋白质在不同盐浓度下溶解度的变化，通过改变溶液的盐浓度，使蛋白质分子凝聚析出。

提取就是将蛋白从组织里***用一定的方法分离出来；一般植物组织或是动物组织中都有脂肪，核酸等物质，提取液中含有大量杂质，分离即是将蛋白与这些杂质分离开；纯化是为了将分离过程中残留的那部分杂质去除，进一步提高蛋白纯度。

求蛋白分离纯化步骤

首先利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中（常用硫酸铵）溶解度的差异而进行沉淀分离，此为盐析法。半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出，清蛋白则仍溶解在溶液中，经离心分离，沉淀部分即为含有γ-球蛋白的粗制品。 用盐析法分离而得的蛋白质中含有大量的中性盐，会妨碍蛋白质进一步纯化，因此首先必须去除。

一般选用2～3种，或同一方法反复进行2～3次。盐析法：在不同浓度的中性盐中蛋白质会脱水，降低带电电势，亲水性变为疏水性，分子间相互凝聚而沉淀（盐析作用）。不同蛋白质盐析所需中性盐的浓度不同，故可分离不同蛋白质。常用中性盐：硫酸铵分析纯试剂。

． 离心去沉淀（去除杂蛋白），上清液即为粗提IgG （即γ球蛋白，如以36％的饱和硫酸铵沉淀血清的产物即为优球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白）。10．过DEAE－纤维素层析柱。（装柱过程见层析技术）。以0.01Mol/L pH4PBS（0.03Mol/L NaCl）洗脱，收集洗脱液。也可***用SephadexG150或G200柱。

盐析法：盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

从菌液中提取质粒，经双酶切回收目的片段，与经同样酶切的原核表达载体连接，再经酶切鉴定及序列分析证实已成功构建融合表达载体。

关于蛋白质的纯化实验，以及蛋白质的纯化实验现象的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。