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蛋白质实验-检测生物组织中的还原糖和蛋白质实验

蛋白质工程 10个月前 (07-03) 119

文章信息一览：

1、公斤体重、需要摄入多少的蛋白质，这些蛋白质来源于你所吃的食物，一日三餐，也可以是乳清蛋***。然后，一般市面上买的乳清蛋*** 补剂，所含的蛋白质大概为70%-80%。

2、鸡蛋含有丰富的胆固醇，氨基酸，蛋白质，维生素，矿物质！鸡蛋有丰富的蛋白质，吃鸡蛋有利于补充人体所需的蛋白质。

（图片来源网络，侵删）

3、第三，蛋白质的鉴定：在试管中滴加2ml 10%鸡蛋清溶液，然后加入2ml 5% NAOH溶液，振荡后在缓慢加入2-3滴 1% CuSO4溶液，摇匀，观察溶液颜色第四，脂肪（油脂）的鉴定：在试管中加入2ml植物油，然后逐滴加入苏丹Ⅲ染液，振荡至颜色不再变化为止。

4、观察溶液颜色变化。（3）蛋白质的鉴定：在试管中滴加2ml 10%鸡蛋清溶液，然后加入2ml 5% NAOH溶液，振荡后在缓慢加入2-3滴1%CuSO4溶液，摇匀，观察溶液颜色。（4）脂肪（油脂）的鉴定：在试管中加入2ml植物油，然后逐滴加入苏丹Ⅲ染液，振荡至颜色不再变化为止，观察溶液颜色。

5、鸡子白的蛋白质，在营养上是优良的，因它含所有的必需氨基酸。

（图片来源网络，侵删）

***用紫外光吸收法测定蛋白质含量，吸光度值为260 nm和280 nm。

各种蛋白质的这三种氨基酸的含量差别不大，因此测定蛋白质溶液在280nm处的吸光度值是最常用的紫外吸收法。该法测定范围为0．01～1．0 mg/ml。样品中核酸对紫外光的吸收会影响蛋白质浓度的测定结果，但核酸的吸收高峰在260nm附近。

用紫外光吸收法测定蛋白质含量的依据是所有的蛋白质分子中都含有：酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸三种氨基酸。因为这三种芳香族氨基酸含有苯环，具有共轭双键，可以吸收紫外线。

紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。低浓度的盐，例如生化制备中常用的（NH4）2SO4等和大多数缓冲液不干扰测定。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值。

1、简述考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的过程如下：试剂准备：考马斯亮蓝G-250染料需要提前溶解，通常使用乙醇和缓冲液混合配制。同时，需要准备标准蛋白溶液，用于制作标准曲线。样本处理：将待测样本与缓冲液混合，然后用组织匀浆器匀浆，保证样本均匀。

2、试剂：（1）考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250， 7%（W/V）乙醇，5%（W/V）H3PO4。

3、蛋白质与考马斯亮蓝g-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。

4、考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质—染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

5、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250，7%（W/V）乙醇，5%（W/V）H3PO4。

6、凯氏定氮法双缩脲法 Folin-酚试剂法紫外吸收法考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作（一）、试剂：考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。

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