蛋白质包涵体复性-蛋白质复性现象说明

蛋白质工程 31

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包涵体变复性的包涵体变性

1、超滤复性:在生产中较多的使用,规模较大,易于对透析速度进行控制,缺点是不适合样品量较少的情况,且有些蛋白可能在超滤过程中不可逆的变性。柱上复性:是最近研究较多并成功的在生产中应用的一种复性方法,包涵体蛋白变性后,在色谱柱上复性,大致可分成疏水柱复性及凝胶柱复性两类。

2、蛋白质在合成之后,于中性pH或接近中性pH的环境下,其本身固有的溶解度对于包涵体的形成比较关键,即是说,有的表达产率很高,如Aspartase和Cyanase,表达产率达菌体蛋白的30%,也不形成包涵体,而以可溶形式出现。

蛋白质包涵体复性-蛋白质复性现象说明
(图片来源网络,侵删)

3、包含体(inclusion bodies)是无定形的蛋白质的聚集,不被任何膜所包围。细胞破碎后,包含体呈颗粒状,致密,低速离心就可以沉淀。包含体难溶于水中,在变性剂溶液(如盐酸胍、脲)中才能溶解。

4、包涵体的复性目前常用的主要有两种方式:1,稀释溶液,但是操作的液体量大,蛋白稀释;2,透析,超滤或电渗透析去除变性剂。

蛋白质复性

1、在变性条件不剧烈,变性蛋白质内部结构变化不大时,除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性,这种现象称为蛋白质的复性(renaturation)。

蛋白质包涵体复性-蛋白质复性现象说明
(图片来源网络,侵删)

2、复性:是指变性的蛋白质在使它变性的理化条件恢复正常后,它的结构和功能可以部分恢复(部分恢复哦)的性质。呼吸链:呼吸链是电子传递链。它定位于线粒体内膜由一组排列有序的H+和电子递体(酶与辅酶)构成的功能单位。呼吸链在线粒体内膜上可能以四个复合物形式存在。

3、氢键很可能会重新形成,从而使蛋白质恢复原来稳定的结构。但是,在环境条件不利的情况下,如高pH或低温度等,氢键则很难再次形成,导致蛋白质失去结构和功能。氢键的断裂和复性取决于外界的条件和蛋白质的特性,在合适的条件下,氢键断裂后可以再次复性,但不是所有情况下都能够实现复性。

4、蛋白质的有一定的空间折叠的多肽链,只有正确的折叠才能有正常的或有活性。蛋白质变性后,一般是空间折叠受到了破坏,复性就要在一定的条件下使蛋白质有正确的折叠。

5、影响蛋白质复性的主要环境因素如下:溶液pH:蛋白质的复性通常在接近其等电点的pH值下进行,因为此时蛋白质分子间的静电相互作用最小,有利于蛋白质的折叠和复性。离子强度:离子强度对蛋白质复性也有影响。高离子强度下,蛋白质分子之间的相互作用增强,可能导致蛋白质复性速度减慢。

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