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蛋白质标准曲线绘制-蛋白质标准曲线的绘制

蛋白质工程 11个月前 (06-06) 137

接下来为大家讲解蛋白质标准曲线绘制，以及蛋白质标准曲线的绘制涉及的相关信息，愿对你有所帮助。

文章信息一览：

截距的值可以为正、负或零，具体取决于模型的特征和数据的分布情况。如果一个线性回归模型中的截距为负值，那么说明当自变量取值为0时，因变量的取值会小于0，即在自变量为0时，因变量的值会向负方向偏移。

这个要看理论了，有些理论公式推导时理论值是过零点的，那么你就要设，有些公式本身就应该过零点。当然，如果理论过零点但标曲做出来不过，也可能是由误差在里面，也可以不设置过零点但要搞清楚是什么误差产生了截距。

（图片来源网络，侵删）

有些标准里截距设为零，有些标准就没有，其实这两种方法都没错，但为计算方便，把截距设置为零会更好一些。有些人做曲线时没有用空白试剂调零（没有0，0那个点），会导致截距很大（其实是空白试剂的响应值），这种情况下是不能设截距为零的，不然会产生很大的误差。

截距可以为负值。例如：方程式 y-2=4（x-3）的截距是什么？方程式 y-2=4（x-3）在x轴上的截距是5；在y轴上的截距是-10。所以截距可以为负值。截距是实数，不是“距离”，可正可负。

绘制标准曲线，用外推法（延长标准曲线和横坐标相交的数的绝对值）就可得到样品液浓度。

（图片来源网络，侵删）

标准曲线法又称校准曲线法，做法是将贮备标准液稀释为所需要的标准系列，用零浓度调仪器零点后，依次由低到高浓度测量标准液的吸光度（或峰高、面积），同时测定样品和样品空白的吸光度（或峰高、面积），在坐标纸上以标准液浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

凯氏定氮法双缩脲法 Folin-酚试剂法紫外吸收法考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作（一）、试剂：考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。

蛋白质浓度测定的标准曲线图如下：蛋白质浓度的测定方法有：双缩脲法：双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。

、利用标准曲线查出回归方程。2）、用公式计算回归方程。3）、或用origin作图，测出回归线性方程。即A595nm=a×X（）+6 一般相关系数应过0.999以上，至少2个9以上。4）、绘图时近两使点在一条直线上，在直线上的点应该在直线两侧。

鼠标移动至标准曲线上方，右键出菜单，选择“add trendline添加趋势线”，去“option选项”，在“display equation on chart在图中显示方程”旁打勾。然后用方程带入吸光度值求解蛋白质浓度。

pierc660测蛋白浓度如下：蛋白质Pierce660法标准曲线屏幕，标准曲线以图形显示所选样品的检测标准品、计算的标准曲线，以及检测的吸光度和计算的浓度之间的关系。一条水平线将Y轴上的样品吸光值连接到标准曲线。一条垂直线将该点连接到X轴上的样品吸光值。

测蛋白浓度的方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法。凯氏定氮法：凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。

蛋白浓度测定的方法：紫外分光光度法紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法，不需要任何试剂，操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收，这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的，所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。

1、制作高浓度于低浓度两条标准蛋白曲线是为了知道蛋白质的含量。根据相关公开资料查询，这个是和化学试剂的林敏度有关做标准曲线可以知道蛋白质的含量，可以消除一些实验条件带来的误差。

2、做标准曲线就是为了计算样品的蛋白含量，标准曲线越标准，计算出来的样品中蛋白质的含量就越接近真实，数据才有意义。

3、测物质的含量。制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。蛋白曲线是用分光光度法测物质的含量，先要制作两条标准曲线，然后才能标准曲线查出所测物质的含量，所以要制两条标准蛋白曲线。

4、绘制标准曲线，用外推法（延长标准曲线和横坐标相交的数的绝对值）就可得到样品液浓度。

5、是用来做蛋白质浓度标准曲线。蛋白质含量测定要设置5组标准管画图是用来做蛋白质浓度标准曲线，用此法做标准曲线，会排除试验中的操作误差等。蛋白质英文名称：protein，是指生物体中广泛存在的一类生物大分子，由核酸编码的α氨基酸之间通过α氨基和α羧基形成的肽键连接而成的肽链。

6、标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量标准曲线一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。

1、作出一条直线 y=0.8156 x +0.0093 。方法：1）画出直角坐标系；2）在x轴上标出 x0=-0.0093/0.8156≈-0.0114 ，在y轴上标出 y0=0.0093 ；3）过 x0 、y0 作直线。该直线即为所求。

2、操作起来简单，但描述起来麻烦，首先把你做标线用的五个点或六个点的浓度和数值分开，分别输入成两行，左键选中全部染成蓝色，点击插入-图表-散点图点击完成，选中其中的一个点，点击右键添加趋势线在趋势线任务框中点，显示公式和R就可以了。

3、第五步：选中这个公式，Ctrl+C***（直接右键没有***选项），然后粘贴到“浓度”一列中最下边空白的单元格中。

4、式中：E（X）、E（Y）分别为X、Y的平均值；D（x）、D（y）分别为X、Y的方差。R就是相关系数，可正、可负；R^2=0。

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