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检测蛋白质实验步骤-蛋白质检测实验教程***

蛋白质工程 11个月前 (05-29) 128

文章阐述了关于检测蛋白质实验步骤，以及蛋白质检测实验教程***的信息，欢迎批评指正。

文章信息一览：

1、科学小实验――蛋白质检测怎么做?
2、简述考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的过程
3、高一化学检验生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验步骤
4、紫外分光光度法测定蛋白质含量
5、蛋白质检验实验步骤

科学小实验――蛋白质检测怎么做?

1、蛋白质简单检测方法：变色试剂法、尿液测定法、低ryg钙素亲和层析法、BCA法或Lowry法。变色试剂法：例如用布拉德福试剂、比尔斯试剂等进行反应，会产生颜色变化，可以通过颜色的变化程度或者光密度的测量来估算蛋白质的含量。尿液测定法：尿液中的蛋白质含量可以作为一种快速检测指标。

2、蛋白质的盐析取5mL蛋白质溶液，加入等体积饱和硫酸铵溶液（浓度为50%饱和），微微摇动试管，使溶液混合均匀后，静置数分钟，球蛋白即析出呈絮状沉淀（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵），用滤纸滤取上清液，滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解，析出的即为清蛋白，再加水稀释，观察沉淀是否溶解。

（图片来源网络，侵删）

3、步骤首先，我们要选择实验材料，最好选择高蛋白的食物浆液，这样会比较方便进行蛋白质的检测，比如豆浆和蛋清就是很好的选择。接着，就要准备双缩脲试剂，双缩脲试剂分为A液：氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液。B液：硫酸铜的质量分数为0.01g/mL的水溶液。

4、g/mL的水溶液。B液：硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。在实验时，需要现在待测液体中先在加入A液，先制造出碱性环境，满足B液与蛋白质反应的条件，这样才可以方便进行蛋白质的检测。一段时间后，如果试管中的液体变为紫色，说明待测液体中含有蛋白质，而且颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

5、凯氏定氮法凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。

（图片来源网络，侵删）

简述考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的过程

1、考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。

2、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250，7%（W/V）乙醇，5%（W/V）H3PO4。

3、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2％影响测定结果。如tritonx-100、sds、np-40等。

4、首先所有使用玻璃器皿都要洗干净。考马斯亮蓝应在乙醇、磷酸介质中尽量溶解充分。然后过滤定容摇匀。用固定的2个比色杯做标准空白比色杯固定，每次测完后用乙醇将测定A值的比色杯洗干净。

5、凯氏定氮法双缩脲法 Folin-酚试剂法紫外吸收法考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作（一）、试剂：考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。

高一化学检验生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质实验步骤

1、步骤：向试管内注入2mL待测组织样液。向试管内注入1mL斐林试剂（甲乙液混合均匀后再注入）。将试管放入盛有50~60℃温水的大烧杯中加热约2min。观察试管中出现的颜色变化。

2、因此，可以根据与某些化学试剂所产生的颜色反应，检测生物组织中糖类、脂肪或蛋白质的存在。操作指南 1．材料　苹果或梨匀浆，马铃薯匀浆，花生***（实验前浸泡3～4 h）及其匀浆，鸡蛋清（稀释10倍后使用），鲜肝提取液，质量分数为1%的葡萄糖溶液，食用油，豆浆，质量分数为1%的淀粉溶液。

3、糖类中还原糖（例葡萄糖、果糖、麦芽糖等）可用斐林试剂检测。先准备组织样液，再准备0·1g/ml的氢氧化钠溶液、0.05g/ml硫酸铜溶液。方法步骤：（1）取2ml组织样液加入1支洁净的试管。

4、做鉴定脂肪的实验，教师可根据本地区的情况选用苏丹III或苏丹IV染液。苏丹III染液遇脂肪的颜色反应为橘***，苏丹IV染液遇脂肪的颜色反应为红色。因苏丹IV染液与脂肪的亲和力比较强，所以，染色的时间应比较短，一般为1 min左右。

紫外分光光度法测定蛋白质含量

1、nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。280 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。

2、紫外分光光度法测定蛋白质含量实验方法如下：实验部分仪器与试剂：La***echUVPOWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；牛血清蛋白；超纯水。试液的制备：牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。

3、原理差异：紫外分光光度法是根据蛋白质分子中的共轭双键在280nm波长处有最大吸收峰的特性，通过测量吸光度值来计算蛋白质含量的。而考马斯亮蓝法是一种染料结合法，利用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成复合物，使染料在595nm波长处的吸光度值发生变化，从而计算出蛋白质含量。

4、掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理和方法掌握紫外光分光光度计使用【实验原理】蛋白质中含有酪氨酸、色氨酸等氨基酸残基，在紫外光280nm波长处有最大吸收峰，故可用280nm的光吸收值（即光密度的大小）来测定蛋白质的含量。由于核酸在280nm也有光吸收，对蛋白质的测定有干扰作用。

5、Tyr）和苯丙氨酸（Phe）的R基团中含有苯环共轭双键系统，在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱带，最大光吸收（max）分别为2727和259nm。由于大多数蛋白质都含有这些氨基酸残基，因此用紫外分光光度法可测定蛋白质含量。因此可以用标准曲线法在280nm测样品吸光度，求得蛋白含量。

6、在紫外分光光度法中，蛋白质中的肽键在280nm处有强烈的吸收。通过测定溶液在280nm处的吸光度，可以确定蛋白质的含量。此法的优点是灵敏度和准确度都很高，可以用于微量蛋白质的测定。考马斯亮蓝法考马斯亮蓝法是一种基于染料结合法的蛋白质测定方法。