首页基因工程正文

基因工程的检验-基因工程的检测方法

基因工程 4个月前 (05-29) 38

接下来为大家讲解基因工程的检验，以及基因工程的检测方法涉及的相关信息，愿对你有所帮助。

文章信息一览：

1、基因检测是用什么方法?最准确的是哪一种?
2、基因工程的步骤,具体一点
3、生物基因工程为什么标记基因检验
4、基因工程实验Ⅱ大肠杆菌质粒DNA的抽提及检测『Protocol』
5、基因工程中基因成功表达的标志是什么?如何检验?

基因检测是用什么方法?最准确的是哪一种?

一般有三种基因检测方法：生化检测、染色体分析和DNA分析。生化检测生化检测是通过化学手段，检测血液、尿液、羊水或羊膜细胞样本，检查相关蛋白质或物质是否存在，确定是否存在基因缺陷。用于诊断某种基因缺陷，这种缺陷是因某种维持身体正常功能的蛋白质不均衡导致的，通常是检测测试蛋白质含量。

例如，临床上***用Sanger直接测序FGFR2基因证实单基因Apert综合征和直接测序TCOF1基因可以检出多达90%的与TreacherCollins综合征相关的突变。值得注意的是，Sanger测序是针对已知致病基因的突变位点设计引物，进行PCR直接扩增测序。单个突变点的扩增包括该位点在内的外显子片段即可，不必将该点所在基因的全部外显子都扩增。

（图片来源网络，侵删）

广泛应用的核酸序列测定方法是直接测序法，目前最先进而且被广泛使用的方法和仪器有第一代的Sanger测序法，第二代的高通量测序法（如美国Illumina公司的Hiseq测序仪和华大基因子公司CompleteGenomics开发的测序方法）等。目前也已出现被称为第三代测序技术的方法，如单分子实时DNA测序法。

基因工程的步骤,具体一点

获得目的基因；（2）基因表达载体的构建；（3）进行遗传转化，将表达载体与DNA片段构成的重组DNA分子导入宿主细胞；（4）转化体的筛选；（5）转化体的遗传鉴定，即重组DNA能随宿主细胞的分裂而分配到子细胞，使子代群体细胞均具有重组DNA分子的拷贝。并且能转录成mRNA、翻译成蛋白质。能分离、鉴定基因产物。

【答案】：重组DNA的主要步骤主要包括以下4个基本步骤：（1）目的基因的获得；（2）目的基因与载体分子在体外进行连接反应，形成重组体；（3）将人工重组的DNA分子导入能进行正常***的寄主细胞，从而得到***：（4）重组体分子的转化子克隆的选择和筛选。[考点]重组DNA的过程。

（图片来源网络，侵删）

目的基因与载体结合基因工程的核心是将目的基因用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA.上，形成重组DNA。根据目的基因片段末端的性质，以及质粒载体与外源DNA上限制酶切位点的性质，可***用黏端连接法或平端连接法。

基因工程的核心步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

基因工程是一次非常复杂的技术操作。它的环节之繁多、操作之细致是其他工程所无法比拟的。但是如果跳开细节问题，基因工程操作流程还是比较明了的。它的基本步骤大致可归纳如下：第一步：制备所需的基因所谓目的基因就是人们依据工程设计中所需要的某些DNA分子的片段。

基因工程特征 1）跨物种性外源基因到另一种不同的生物细胞内进行繁殖。2）无性扩增外源DNA在宿主细胞内可大量扩增和高水平表达。

生物基因工程为什么标记基因检验

1、标记基因的作用是：“为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。（也就是说是，鉴别和筛选含有目的基因的细胞）”。所以基因工程的第四步“目的基因的检测和鉴定”没有用到标记基因。标记基因的作用不是目的基因的检测和鉴定，而是鉴别和筛选含有目的基因的细胞。

2、标记基因的功能是为了方便我们更容易挑选被转化的个体。虽然直接检测转化子产物确定转化子从理论上来说可以，但是其数量之多工作量之大成本之高，决定了不可能***取这一方式进行转化个体筛选。

3、标记基因的作用是鉴定表达载体是否导入受体细胞。因为我们用肉眼看不到，只能通过检测标记基因是否在，就能确定表达载体是否导入受体细胞了。

4、在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否；在基因定位意义上来说，它是对目的基因进行标志的工具，通常用来检测目的基因在细胞中的定位。标记基因广泛应用于分子生物学、细胞生物学、发育生物学等方面的研究。

5、而基因工程里所说的标记基因还包括植物抗性标记基因，它位于农杆菌双元载体的LB和RB之间，而LB和RB是质粒与染色体重组的两个位点，所以LB和RB之间的基因如抗性基因和与其串联的目的基因就能够整合到植物染色体中，这样，目的基因和抗性基因整合进入一个细胞，随着细胞的分裂，获得转基因植株。

基因工程实验Ⅱ大肠杆菌质粒DNA的抽提及检测『Protocol』

质粒的抽提与纯化实质上是将质粒DNA与细菌的基因组染色体DNA、RNA、蛋白质、细胞膜等细胞器及其他大分子物质分离的过程，因此质粒的抽提大致可分为：细菌的培养、收集与裂解；质粒DNA 的分离与纯化；浓度、纯度的鉴定三个过程。

碱裂解法：此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下：接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。37℃振荡培养过夜。取5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。

本实验旨在从大肠杆菌中提取质粒DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳检测提取出的质粒DNA的纯度和大小。

碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法，其提取原理是一样的，只需体积按一定比例扩大。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时，对于小量制备的质粒DNA，经过苯酚、氯仿抽提。

基因工程中基因成功表达的标志是什么?如何检验?

1、目的基因成功表达的标志是在生物体内检测到了该基因对应的蛋白质，表达出了相应的性状。基因工程（英语：genetic engineering，又称为遗传工程、转基因、基因修饰）是一组使用生物技术直接操纵有机体基因组、用于改变细胞的遗传物质的技术。包括了同一物种和跨物种的基因转移以产生改良的或新的生物体。

2、检测分三种，首先是通过对标记基因的检测，通常用DNA分子杂交技术，来检验标记基因（目的基因）是否成功的导入受体细胞。再用DNA分子杂交技术，来看目的基因导入后是否成功转录出信使RNA。最后可以用抗原-抗体检验，来验证导入基因是否成功表达。用标记基因检测与鉴定只是一个简写。

3、基因工程中主要用分子杂交法检测是否成功，首先用DNA-DNA分子杂交法检测目标蛋白基因导入受体细胞是否成功，然后用DNA-RNA分子杂交技术检测是否转录产生mRNA，最后用抗原-抗体杂交技术检验是否合成相应的蛋白质。

4、标记基因是一种已知功能或已知序列的基因，能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说，它是重组DNA载体的重要标记，通常用来检验转化成功与否；在基因定位意义上来说，它是对目的基因进行标志的工具，通常用来检测目的基因在细胞中的定位。

关于基因工程的检验和基因工程的检测方法的介绍到此就结束了，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于基因工程的检测方法、基因工程的检验的信息别忘了在本站搜索。