蛋白质细胞定位-细胞中蛋白质的定位实验报告
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蛋白质在细胞内的定位
1、生物体中到处都有蛋白质,蛋白质是生命运动的基础 细胞核里有和dna结合生成染色体的蛋白质,细胞质中有维持生命活动的蛋白质,而且生物体中还有无处不在的酶,这些都是蛋白质。
2、***白是指在细胞质内合成, 然后运输到核内起作用的一类蛋白质。如各种组蛋白、DNA合成酶类、RNA转录和加工的酶类、各种起调控作用的蛋白因子等。***白一般都含有特殊的氨基酸信号序列, 起蛋白质定向、定位作用。
3、细胞核内的蛋白质在其肽链一段有一段特定的氨基酸序列,这段序列叫核定位信号,在importin的帮助下,通过核孔进入细胞核。
4、功能基因研究中,经常会进行基因编码的蛋白质的亚细胞定位的,如待定位蛋白和GFP、YFP、RFP等融合后,观察融合蛋白在细胞内的定位,或者将预测部位(如该蛋白可能在液泡膜上)的蛋白提取出来,进行western实验,来验证等。
为了定位某种特异蛋白在细胞中的含量或者分布,可以***取什么方法?_百度...
观察DNA和RNA在细胞中的分布选用材料除人的口腔上皮细胞外,还可以用洋葱鳞片叶表皮细胞(是无色的)。紫色洋葱外表皮或叶肉细胞不可以,前者液泡中有紫色物质,后者有叶绿体,会影响后期染色后的观蔡。
可以使用特定的抗体进行Western blot分析,以比较这些蛋白质在7种细胞中的表达水平。
免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。 体液免疫测定主要利用抗原与相应抗体在体外发生特异性结合,并在一些辅助因子参与下出现反应,从而用已知抗原或抗体来测知未知抗体或抗原。
蛋白质在细胞内的定位方法?方法和原理
1、在细胞中的定位很好解决,将该基因标记上绿色荧光蛋白,可以在很高级的激光共聚焦下观察不同***下该蛋白的时空变化。如果担心融合表达GFP对蛋白有影响,也可通过标记抗体做细胞免疫荧光,同样可以验证细胞定位。
2、细胞中蛋白质的运输有两种方式:共翻译运输和翻译后运输,内膜系统参与共翻译运输,是分泌蛋白质分选的主要系统。
3、证实两个蛋白在细胞膜上都有定位有许多种方法:1,荧光报告基因:两个蛋白各自用荧光蛋白标记,比如GFP和RFP等,两者荧光光谱不可重叠,在共聚焦显微镜下在各自通道观察和merge后的图像分析,可见荧光重叠,即可证明共定位。
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