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蛋白质透析脱盐-蛋白质透析脱盐实验报告

蛋白质工程 8个月前 (04-16) 78

本篇文章给大家分享蛋白质透析脱盐，以及蛋白质透析脱盐实验报告对应的知识点，希望对各位有所帮助。

文章信息一览：

1、因为盐析不会是蛋白质变性失活，而透析是盐会电离形成离子，因此盐离子会通过半透膜出去，而蛋白质是大分子不会出去。如此就得到目的了。

2、透析袋有一定的截留分子量，高于此分子量的大分子物质比如蛋白质不能通过，而一些小分子物质比如无机盐、单糖可以通过半透膜，这样可以使得蛋白质分子和小分子物质分开。

（图片来源网络，侵删）

3、根据电荷的方法也不应该考虑，因为盐和蛋白质都是带电荷的，不好分离。应该重点考虑根据分子大小不同的纯化方法。透析能够分离蛋白质与离子，但是透析的过程中透析液会进入蛋白样品中，造成蛋白质的稀释。

4、常用的是凝胶过滤层析脱盐，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

5、盐析：向蛋白质溶液中加入高浓度中性盐破坏胶体的稳定性，中和蛋白质所带的电荷，又可以破坏水化膜。此法沉淀蛋白质一般不变性，可通过透析出去中性盐，仍保持生物学活性。

（图片来源网络，侵删）

1、需要注意的是，盐析法的操作过程中需要注意以下几点：加入硫酸铵溶液的速度要缓慢，以免蛋白质变性。离心分离时要控制好离心速度和时间，以使沉淀物和上清液充分分离。透析时要保持水流畅通，以避免透析袋破裂或样品变质。

2、固体法：搅拌下，少量多次加入饱和溶液法：在蛋白质溶液中加入预先调好pH的（NH4）2SO4溶液。透析法：将盛蛋白质溶液的透析袋放入一定浓度的（NH4）2SO4溶液中，通过透析作用改变蛋白质溶液中的盐浓度。使用于小体积样品。

3、蛋白质沉淀现象。这种现象通常叫做盐析，在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。

低温有机溶剂沉淀法：用与水可混溶的有机溶剂，甲醇，乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋白质较易变性，应在低温下进行。

扩散渗析。蛋白质有机体系中除盐，充分利用丝素蛋白溶液本身的高浓度差，在以浓度差为推动力脱盐效率较高时，使用扩散渗析进行脱盐。丝素蛋白溶液是脱胶蚕丝经一系列的纯化工艺精制后所得的淡***澄清蛋白水溶液。

盐析法可以使蛋白质沉淀。盐析法的原理蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

盐析法：盐析法是一种常用的蛋白质分离方法，原理是向蛋白质溶液中加入高浓度的盐溶液，使蛋白质的溶解度降低，从而从溶液中析出。常用的盐析剂有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。

其原理是利用蛋白质、酶和核酸等生物大分子对某些物理或化学因素敏感性不同，有选择地使之变性沉淀，以达到分离提纯的目的。

根据溶解度差别：等电点沉淀、盐溶、盐析、有机溶剂分离沉淀。根据电荷不同：各种电泳、离子交换层析选择性吸附和利用对配体特异亲和力的纯法方法：亲和层析。显然，蛋白质脱盐，是将蛋白质与小分子物质分开。

凡盐析所获得的粗制蛋白质（盐析得到的IgG）中均含有硫酸铵等盐类，这类将影响以后的纯化，所以纯化前均应除去，此过程称为“脱盐”。脱盐常用透析法和凝胶过滤法，这两种方法各有利弊。

因为盐析不会是蛋白质变性失活，而透析是盐会电离形成离子，因此盐离子会通过半透膜出去，而蛋白质是大分子不会出去。如此就得到目的了。

我曾经分离过藻红蛋白用的是硫酸铵盐析，盐浓度相当的高，用的就是透析袋。硫酸铵分子量：1314！应该没问题，而但蛋白质并未变性。

首先从层析术中流出，实现脱盐。用凝胶过滤法脱盐时，为了使盐同蛋白质充分地分离，除了应选用足够长的层析柱之外，还应对样品的体积加以限制。样品的体积如果过大就导致蛋白质带同盐带不能分开。

选择性吸附和利用对配体特异亲和力的纯法方法：亲和层析。显然，蛋白质脱盐，是将蛋白质与小分子物质分开。上面的方法中，根据溶解度差别这几种方法还得加盐，与脱盐的目的背道而驰。

常用的脱盐方法有透析法、电透析法和凝胶过滤法。透析法及电透析法耗时长，样品稀释度大，不易放大进行大规模生产，所以工业生产中应用较少。

透析时把待纯化的蛋白质溶液装在半透膜的透析袋里，放入透析液（蒸馏水或缓冲液）中进行的，透析液可以更换，直至透析袋内无机盐等小分子物质降低到最小值为止。

常用的是凝胶过滤层析脱盐，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子，简单直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟至半小时完成。

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