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拉曼光谱蛋白质-拉曼光谱表征什么

蛋白质工程 2个月前 (03-15) 41

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牛奶中蛋白质含量的测定：凯氏定氮法。凯氏定氮法介绍如下：凯氏定氮法是由丹麦化学家凯道尔于1883年建立的，现已发展为常量、微量、平微量凯氏定氮法以及自动定氮仪法等，是分析有机化合物含氮量的常用方法。

使用折射计：折射计是一种可以测量液体中溶解物质浓度的仪器。通过将牛奶样本放入折射计中，可以测量出牛奶中的蛋白质含量。这种方法需要一些专业知识和设备，但是它可以提供相当准确的结果。使用光谱分析法：这是一种更复杂的方法，通常在实验室中进行。

（图片来源网络，侵删）

结果计算：通过计算样品消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，试剂空白消耗的体积，以及氮换算系数，计算样品中蛋白质的含量。

四个。红外光谱，人体许多分子如蛋白质、DNA、RNA、糖类等在红外光区域有特征吸收峰，红外光谱用于检测人体组织的成分和结构。拉曼光谱是一种散射光谱，用于检测人体组织的分子结构和化学成分。荧光光谱，人体分子在特定波长光的激发下会发出荧光，荧光光谱能用于检测人体组织的成分和结构。

紫外吸收光谱是一种带状光谱，分子中存在多种已被确认的吸收带，其中包括K带、R带、B带、E1和E2带等。这些吸收带的产生源于不同的电子跃迁机制。K带是由于分子中两个或两个以上的π键发生共轭，导致π电子向π*反键轨道跃迁的结果。这种跃迁可以简单表示为π→π*。

（图片来源网络，侵删）

分子光谱的丰富性体现在多个方面，其中主要包括纯转动光谱、振动-转动光谱带和电子光谱带。纯转动光谱反映了分子绕轴旋转的能级跃迁；振动-转动光谱带则展示了原子在平衡位置附近振动与分子旋转之间的相互作用；而电子光谱带则是电子在不同能级之间跃迁的结果。

1、让我通过一个实例来解释。在我的实验室最近进行的一项光学成像研究中，我们***用了一种高灵敏度的拉曼光谱技术，实现了对细胞活体中化学反应的实时监测。这项技术关注的是细胞随时间的变化过程，而非分子结构的详细分析。

2、实验室做一个光学成像，有一个技术是用高灵敏度拉曼光实时实地地看细胞活体中的化学分析，不是看分子的结构怎么样，而是观察不同细胞随着时间如何变化。在美国肥胖症很多，其中的油脂就是甘油三酸脂，我们不用加染料分子，就可以看到这些油滴，也可以看到DNA在细胞中的分布。

蛋白质结晶的基本原理是通过控制条件使蛋白质分子形成有序排列的晶体结构。调节结晶条件在蛋白质结晶过程中，溶剂与蛋白质之间的相互作用是至关重要的。这些相互作用包括静电相互作用、氢键和疏水相互作用等。选择合适的溶剂和调节溶液的pH值可以改变这些相互作用，有利于蛋白质结晶。

蛋白质结晶是指在其溶液中由于溶剂溶解度的改变或其他原因，从原溶液中析出，通过分子间的作用力相互聚集形成的具有特定规格排列的析出物，即蛋白质晶体。故结晶的关键点在于待结晶物可析出，有结晶核，待结晶物为同种分子且空间结构相同。一般可以引起蛋白质变性的原因分为两类，分别是物理和化学因素两类。

蛋白质结晶，一种可能你并不熟悉的领域，却在生物学、医学研究中扮演着重要角色。蛋白质，作为生物体内执行多种功能的基本单位，其结构的精细程度直接影响着其功能。而蛋白质结晶，就是将蛋白质分子在特定条件下排列成有序结构的过程。让我们一起探索蛋白质结晶的奥秘。

通常的做法是参考样品的紫外-可见吸收光谱，选取吸收峰较高的波长来进行激发。然而，这一选择还需考虑样品的荧光情况。如果样品具有较强的荧光，那么Raman信号可能会被掩盖。在这种情况下，为了确保能够获得清晰的Raman信号，就需要调整激发波长，选择吸收峰相对弱一些的位置。

在选择激发波长时，需要根据待检测样品的特性来决定。荧光干扰和共振增强是重要的考虑因素。科研级便携式拉曼光谱仪和便携式手持式拉曼光谱仪能够满足不同测试需求，提供灵活性和便利性。

在如此多样的激发波长的拉曼光谱仪（激光器和光谱仪一般都是配对的，无法通过购买多种激发波长的激光器适用同一个光谱仪），根据自身所需检测样品的特性，来挑选合适的激发波长。荧光干扰、共振增强都是需要考虑的。表2是科研级便携式拉曼和亲民型的手持式拉曼，满足您对测试各种样品的需求。

手持式拉曼光谱仪技术参数如下：它具有广泛的光谱覆盖范围，从250厘米至2875厘米，能提供精细的分辨率，7至5厘米（以脉冲半高峰宽计算）。激光激发波长设定在785纳米，偏差不超过0.5纳米，激光输出功率可自动调节，保证在300毫瓦或更低的水平。

拉曼光谱仪使用方法如下：拉曼光谱仪组成和使用散射光相对于入射光频率位移与散射光强度形成的光谱称为拉曼光谱。拉曼光谱仪一般由光源、外光路、色散系统、及信息处理与显示系统五部分组成。拉曼光谱仪的使用，首先要具有激发波长，一般使用的激发波长都是几个固定的，如785nm，532nm，1064nm等等。

1、在透明介质的散射光谱中，与入射光频率相同的成分称为瑞利散射；频率对称分布在入射光频率两侧的谱线或谱带称为拉曼光谱。其中频率较小的成分称为斯托克斯线，频率较大的成分称为反斯托克斯线。瑞利散射线的强度只有入射光强度的10^-3，而拉曼光谱强度大约只有瑞利线的10^-3。

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