蛋白质c端测序-蛋白质测序方法的主要原理
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请教:氨基酸序列的测定方法
有两种方法,一是直接测序列法,常用Edman降解法,在弱碱性条件下多肽连N端氨基酸(阿尔发)与PITC反应,标记为苯氨基硫代甲酰蛋白质。肽链中的第一个肽键变弱,在无水酸的存在下发发生降解,第一个氨基酸(AA1)经过分子重排成为PTH-AA1结合层析技术即可确定氨基酸的性质。
质谱法:· 质谱法是一种强大的分析工具,用于确定氨基酸的质量或质量/电荷比(m/z),推断氨基酸序列。· 在蛋白质质谱法中,蛋白质或肽经酶切割成小片段后引入质谱仪分析。· 串联质谱(MS/MS)提供肽段详情,有助于精确确定氨基酸序列。
Edman降解才是氨基酸序列的测定技术。但是它不能测超过40个残基的序列。所以测大的蛋白质的序列时,需要用化学试剂将蛋白质降解为一些肽段。即需要水解。水解时一般用三氟乙酸进行酸水解。酸水解就是加热酸进行水解,而碱水解就是加入碱进行水解。蛋白质一般用酸水解。而酯类则两种水解方式都常用。
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