双缩脲检测蛋白质含量-双缩脲检测蛋白质含量实验报告
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双缩脲法测定蛋白质
双缩脲法测定蛋白质如下：双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
双缩脲反应主要涉及肽键，因此受蛋白质特异性影响较小。且使用试剂价廉易得，操作简便，可测定的范围为1～10mg蛋白质，适于精度要求不太高的蛋白质含量的测定，能测出的蛋白质含量须在约0.5mg以上。双缩脲法的缺点是精确度低、所需样品量大。
其颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。试剂和器材 试剂：（1）标准蛋白溶液（5mg/ml）：准确称取已定氮的酪蛋白（干酪素或牛血清白蛋白）用0．05mol/L氢氧化钠溶液配制，冰箱存放备用。
方法： 标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。
在蛋白质的鉴定实验中，最好选用富含蛋白质的生物组织，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是稀释的鸡蛋清。双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。
双缩脲法测定蛋白质含量
1、双缩脲法测定蛋白质如下：双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
2、其颜色深浅与蛋白质的浓度 成正比，可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。 试剂 和器材 试剂 ：（1） 标准蛋白溶液（5mg/ml）：准确称取已定氮的酪蛋白（干酪素或牛血清白蛋白）用0．05mol/L氢氧化钠溶液配制，冰箱存放备用。
3、双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液；双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。先将双缩脲试剂A加入组织样液，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B，振荡均匀。
双缩脲法测定蛋白质含量计算
1、双缩脲法测定蛋白质含量计算如下：学习双缩脲法测定蛋白质的原理和方法 实验原理：具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫红色复合物。而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也能与铜离子形成紫红色配位化合物，其最大光吸收在540nm处。
2、计算蛋白质浓度：将待测样品的吸光度值代入标准曲线，得出蛋白质的精确浓度。方法的魅力与局限 双缩脲法的优势在于：反应灵敏度高，颜色变化显著，干扰物质较少，测定过程快速简便。适用于快速初步测定，尤其在需要快速结果的场景。然而，它也并非完美：灵敏度相对较低，适合1-20 mg/mL的蛋白质范围。
3、方法：标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。
4、于540nm波长下测定光吸收率。以酪蛋白的含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。样品测定 取样品溶液1ml加入4ml双缩脲试剂，摇匀后在室温下反应30min，测定光吸收值，从标准曲线查出蛋白质含量。
5、双缩脲法测定蛋白质如下：双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液，呈蓝色，由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时（多肽），试液中的铜与多肽配位，配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度，在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
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