蛋白质转染-蛋白质染色技术

文章阐述了关于蛋白质转染，以及蛋白质染色技术的信息，欢迎批评指正。

文章信息一览：

• 1、自己构建的转染质粒可以生产蛋白质吗?
• 2、影响质粒转染效率的因素有哪些?
• 3、细胞转染的目的是什么?

自己构建的转染质粒可以生产蛋白质吗?

1、我记得我们选修的书里有说过，书中讲的是获得大量抗体，我想你应该能试试，如果你不急，我晚上回家给你看看，现在记不太清楚了。

2、一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72 小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些 报告系统如荧光蛋白，β - 半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA 既可 以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。

3、基因克隆：从感兴趣的源中提取目标蛋白的基因序列，并将其克隆到适当的表达载体上。常用的载体包括质粒和病毒。转染/转化：将重组的表达载体导入到宿主细胞中。对于真核细胞，常用的方法是转染；而对于细菌细胞，常用的方法是转化。

4、质粒问题。质粒可能弄错了，先鉴定一下质粒上是否带有你的目的片段。理论上转染质粒有表达目的蛋白也是有效应的，可能是转染质粒的表达影响目的蛋白表达的情况。建议重新构建质粒了，水平转染的同时就转染个GFP的质粒验证同批细胞蛋白的转染效应作为正对照。

5、质粒载体能够转化但是不扩散。质粒的结构及性质 质粒是细菌染色体外的DNA分子，存在于细胞质中，具有自主***能力，使其在子代细胞中能保持恒定的拷贝数，并表达所携带的遗传信息。质粒不是细菌生长繁殖所必需的物质，可自行丢失或人工处理而消除，如高温、紫外线等。

影响质粒转染效率的因素有哪些?

1、A260/A280 大于8 说明你样品中RNA含量太高，质粒不纯，但理论上应该不至于影响转染效率，因为RNA会很快被降解（如果你不刻意***取RNA保护手段的话）；A260/A280 小于8，说明蛋白质含量高或试剂苯酚未除干净（蛋白和苯酚在280nm均有吸收峰），会降低转染效率，因为你质粒DNA浓度不够。

2、质粒反复冻融灭菌。质粒转染受制于质粒大小、转染介质的限制，对很多细胞转染效率低，利用原生质体的形成与再生及反复冻融菌体均可消除细菌中的质粒。质粒是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主***的较小的DNA分子。

3、空载体转染效果比质粒好的原因：控制实验变量：在某些实验中，需要对比载体和目标基因的表达差异，为了排除载体本身对实验结果的影响，需要将空载体作为对照组进行实验。优化表达条件：在某些情况下，目标基因的表达量过高或过低，需要通过调整载体的浓度或转化量来优化表达条件。

4、同时转染质粒效率是不一样。根据查询相关***息显示，优化条件质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。

5、如遇转染效果不佳，可***取优化方案对实验进行优化： 优化转染条件包括：转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 同时细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。转染细胞用的质粒必须保证无菌。

细胞转染的目的是什么?

1、感染过程则依赖于慢病毒的特性，它可以有效地感染神经元、肝细胞、心肌细胞等不同类型的细胞，为基因治疗和研究提供了理想的工具。对于难转染的细胞，如原代细胞和干细胞，慢病毒能显著提高基因的转导效率，并增加目的基因与宿主基因组的整合。

2、含义不同。侵染是一个汉语词语，又称感染。宿主生物被致病的病毒、细菌或其他微生物和传病媒介侵袭的过程。转染是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。所以侵染和转染的区别是含义不同。细胞转染是指将外源分子如 DNA、RNA、蛋白质等导入到真核细胞的技术。

3、什么是转染？转染是指将外源 DNA 或 RNA 片段导入到真核细胞而获得新的遗传标志的过程。一般转染技术包括两大类：瞬时转染和稳定转染。就瞬时转染而言，转染的 DNA/RNA 没有整合到宿主基因组中，所以外源 DNA/RNA 将会在后续的细胞有丝分裂过程中丢失。

4、蛋白质转染是直接把表达出的目标蛋白转入细胞的过程，一般要用到辅助蛋白或构构建融合蛋白帮助目标蛋白进入细胞质，转染方法一般是共孵育。对于用一般方法进行基因转染效果很差的细胞系，可以考虑使用蛋白转染，但是因为基因没有导入，无法持续表达，因此只适用于瞬时转染。

5、揭秘细胞基因的完美导入：转染技术详解转染，如同基因工程中的魔术师，将外源DNA或RNA巧妙地引入真核细胞，是探索生命奥秘的关键工具。在分子生物学与细胞生物学的前沿，转染已经成为研究基因功能调控、突变分析以及蛋白质生产的重要手段，应用范围日益扩大。

6、野生型的HIV大小约为8kb，故插入片段一般在4-5kb左右，这对于大部分的实验来说应该够用了。具体可以看看这个链接：http：//baike.baidu.com/view/91276htm --- 目的：其实就是以 病毒为载体，转染细胞，让外源基因表达。

关于蛋白质转染，以及蛋白质染色技术的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。