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蛋白质沉淀的方法有-蛋白质沉淀的方法有哪些

蛋白质工程 10个月前 (06-20) 140

接下来为大家讲解蛋白质沉淀的方法有，以及蛋白质沉淀的方法有哪些涉及的相关信息，愿对你有所帮助。

文章信息一览：

1、应根据沉淀剂的作用范围来选择，因为一种蛋白质沉淀剂只能对一种或一类蛋白质进行沉淀，所以要根据你需要沉淀的蛋白质种类来选择沉淀剂的种类。

2、有机溶剂沉淀法：有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二：其与盐溶液一样具有脱水作用；其有机溶剂的介电常数比水小，导致溶剂的极性减小。蛋白质沉淀剂：蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用，常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。

（图片来源网络，侵删）

3、由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀。影响盐析的因素有：（1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶介度降低。

1、有机溶剂沉淀法中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。

2、沉淀蛋白质的方法主要有：盐析、有机溶剂、生物碱试剂、重金属盐、加热凝固。分析如下：（1）盐析破坏蛋白质的水化膜和电荷，***用不同浓度盐可将不同的蛋白质分段析出，盐析的蛋白质不变性，盐析作用是可逆的。（2）有机溶剂可破坏蛋白质的水化膜，若调节pH=pI，则更易沉淀。

（图片来源网络，侵删）

3、一般最常见的是盐析沉淀，就是在蛋白质溶液中加入一定量的硫酸铵，蛋白质便会沉淀下来，不同蛋白沉淀所需要的硫酸铵浓度不一样，通过这个方法也可以对蛋白进行初步的纯化分离。

4、可逆沉淀是分离纯化蛋白质的基本方法，如等电点沉淀法、盐析法（saltingout）等，在低温下使用有机溶剂（如乙醇或丙酮）短时间作用于蛋白质也可以使蛋白质发生可逆沉淀。

5、盐析法：多用于各种蛋白质和酶的分离纯化，不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。等电点沉淀法：不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。

6、沉淀出的蛋白质可不变性，所以盐析法是分离制备蛋白质或蛋白类生物制剂的常用方法有机溶剂沉淀法：通过破坏蛋白质的水化膜而使蛋白质沉淀，此方法在常温下可使蛋白质变性，低温下可使变性速度减慢重金属盐沉淀法：可与蛋白质结合形成不溶于水的蛋白质沉淀，引起蛋白质变性。

盐析法：多用于各种蛋白质和酶的分离纯化，不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。等电点沉淀法：不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。

使蛋白质沉淀的方法有3种。盐析法在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出，这种方法称为盐析。常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。

蛋白质从溶液中析出的现象，称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、重金属盐沉淀法、生物碱试剂与某些酸（如三氯醋酸）沉淀等。

盐析法：盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。

常见的蛋白分离纯化方法：盐析法、盐析法、离子交换层析法、亲和层析法、凝胶电泳法、高效液相色谱法。盐析法：利用不同蛋白质对盐浓度的敏感性差异，通过逐渐加入盐类使蛋白质沉淀析出，再通过离心去除沉淀物。

蛋白质的分离纯化方法：根据蛋白质溶解度不同的分离方法蛋白质的盐析法：中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。

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