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基因工程的方法-基因工程的方法和步骤

基因工程 10个月前 (06-28) 144

今天给大家分享基因工程的方法，其中也会对基因工程的方法和步骤的内容是什么进行解释。

文章信息一览：

基因工程主要包括基因重组、基因组的改造、核酸序列分析、分子进化分析、分子免疫学、基因克隆、基因诊断和基因治疗等内容。

目的基因的制备（从细胞中分离目的基因或人工合成目的基因）；（2）基因载体（细菌质粒或病毒DNA）制备；（3）目的基因与载体的连接。重组DNA的遗传转化包括受体细胞的转染，转化细胞的筛选和转基因生物的检测。

（图片来源网络，侵删）

基因工程的核心是将目的基因用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA.上，形成重组DNA。根据目的基因片段末端的性质，以及质粒载体与外源DNA上限制酶切位点的性质，可***用黏端连接法或平端连接法。

国外目前用生物反应器生产狂犬疫苗主要有两种工艺方法。（1）在大型细胞培养罐（通常罐体积在800升至1200升之间）中，用Vero细胞作为宿主细胞，用球形微载体（商品名Cytodex-1）作为细胞生长载体，每升培养基只能加入3-5克微载体；批式培养，达到一定细胞密度后接种病毒。

基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它系***用现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，克隆进入啤酒酵母菌或CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）中，通过培养这种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表面抗原亚单位。

（图片来源网络，侵删）

基因工程疫苗是使用DNA重组生物技术，把天然的或人工合成的遗传物质定向插入细菌、酵母菌或哺乳动物细胞中，使之充分表达，经纯化后而制得的疫苗。应用基因工程技术能制出不含感染性物质的亚单位疫苗、稳定的减毒疫苗及能预防多种疾病的多价疫苗。

基因工程乙肝疫苗的生产过程更为先进，通过基因工程技术实现。科研人员首先构建包含乙肝表面抗原基因的重组质粒，然后将其导入酵母或CHO细胞中，让这些细胞生产乙肝表面抗原蛋白。

并且牢牢抓住。由于抗体不能直接杀死病毒，只是使其生成沉淀，所以在抗体内加入特效药，可以精确打击病毒，这就是生物***。

目前人工合成基因的方法主要有两条途径。一条途径是以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需要的基因。

目前人工合成基因的方法主要有两条。一条途径是以目的基因转录成的信使rna为模版，反转录成互补的单链dna，然后在酶的作用下合成双链dna，从而获得所需要的基因。

人工合成基因的一种方法是利用目的基因转录产生的mRNA作为模板，通过反转录过程生成单链DNA。该单链DNA随后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因序列。另一种方法是基于已知的蛋白质氨基酸序列，推断出相应的mRNA序列。依照碱基互补配对原则，进一步推断出对应基因的核苷酸序列。

对于较短的基因（60～80bp），可以通过化学方法分别合成两条DNA链，让这两条链在适当条件下退火，形成双链。为了获得大于300bp的DNA双链，可以***取短DNA片断法或短核苷酸片段法。

不需要模板，使用DNA合成仪合成DNA是一种化学合成过程，类似于是从无到有的合成过程。整个合成步骤共分为4步骤：脱保护-偶联-加帽-氧化。合成过程中需要使用的合成原料有：（1）4种合成单体：AGCU；（2）合成试剂：脱保护剂、活化剂、盖帽剂、氧化剂以及符合质量的乙腈等；（3）合成载体，如CPG。

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